PCR有多少种?不必再次发生晕分不清楚(附引物设计网站)

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PCR有多少种？不必再次发生晕分不清楚(附引物设计网站)

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聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）它是一种特定扩张扩大DNA分子生物科技广泛用于微生物、临床医学、法医鉴定乃至考据学等行业。PCR 分成几种？差别和联系是什么？

一、PCR与RT-PCR

大家都知道，PCR工作原理是模板DNA （template DNA）特殊扩大扩大的反映。模板DNA基因可以用DNA也可作为模板应用RNA链逆转录（reverse transcription， RT）变成相辅相成DNA （complementary DNA， cDNA），随后以此作为模板根据PCR开展 DNA增加。一般来说，如果采用逆转录cDNA作为一个模板，它能够被称作RT-PCR（reverse transcription-PCR, 逆转录 PCR）。简单的说，RT-PCR便是在基本上PCR反映之前就有RNA逆转录（RT）逆转录新产品的全过程cDNA开展PCR扩增。

二、什么叫 qPCR、real-time PCR？

实际上 qPCR（quantitative PCR ）和Real-time PCR是一回事，全是即时定量的PCR，是指PCR每一个循环系统都是有实时动态（real-time）因而，能够精确剖析开始模板的总数。其工作原理是在PCR在反映系统软件里加入莹光官能团，应用生成双链DNA在过程中使用的莹光数据信号积淀实时监控系统PCR因而，加工工艺又被称为实时荧光定量PCR （real-time fluorescent quantitative PCR）。

需注意:尽管real-time PCR和 reverse transcription PCR（反转录PCR）英语基础语法能够简称为RT-PCR，并且参考文献工作频率挺高。但是，国际性协议书一般是：RT-PCR专指反转录PCR，而real-time PCR一般简称为 qPCR（real-time PCR?quantitative real-time PCR?qPCR）。不但中国科研人员有时候会困惑不已，外国科学家也会感觉疑惑。

三、什么叫 qRT-PCR？

quantitative RT-PCR中间“RT”是 reverse transcription(逆转录)的思，。qRT-PCR是指 qPCR RT-PCR组成，也就是说将mRNA逆转录为cDNA随后做为模板实时荧光PCR剖析。一样，由于qPCR=real-time PCR=quantataive real-time PCR,因此qRT-PCR=RT-qPCR(reverse transcription qPCR)=RRT-PCR(real time RT-PCR,这类简称非常罕见)。

简单点来说，小赵个人觉得，RT-PCR从反映模板的视角取名，即模板是否属于逆转录（RT）形成的cDNA； qPCR从方式的视角取名，即方式能否即时定量，二者并不是相互对立这个概念，二者的融合是qRT-PCR。

四、除了qRT-PCR外，RT-PCR能定量吗？

实际上PCR有两种方式能够定量商品：一种是real-time PCR，即即时定量PCR（qPCR）；另一种是End-point PCR，即终点站定量PCR终点定量PCR要在PCR反映完成后，根据上色商品、分析与定量获得相片。因为流程繁杂琐，主观性强，定量有误，没法实时监控系统qPCR技术性发生后开始替代，qPCR是当前病毒检测金最管用、最敏感标准方法。

关键汇总：

1. RT-PCR是逆转录PCR，一定涉及到RNA逆转录成cDNA的一个过程；

2. 检验RNA表述相对含量PCR一定是RT-PCR反过来，假如模板并不是，RNA基因表达成的cDNA，切勿写出RT-PCR;

3. real-time PCR的简称并不是RT-PCR，而是qPCR,中文名字为即时定量聚合酶链反应(莹光)；

4. qPCR、real-time PCR、quantataive real-time PCR三者等同于;

5. quantataive real-time PCR 不可以缩写成qRT-PCR;

6. qRT-PCR、RT-qPCR、RRT-PCR三者等同于，归属于RT-PCR，又归属于qPCR。

最终，推荐几个PCR网站实用

查看基因序列的权威性网站，美国国家生物科技网络信息中心遗传基因网站。

美国国家生物科技网络信息中心定制的网站具备功能齐全、网页页面繁杂、学习培训时间久等特点。

2个机构网站，数据信息很有可能不足权威性，仅作参考。

除此之外 Oligo 6.0和Primer 5.0 是当前比较常见的二种引物设计软件。

参考文献：

1. Rajeevan MS, Vernon SD, Taysavang N, Unger ER (February 2001). "Validation of array-based gene expression profiles by real-time (kinetic) RT-PCR". J Mol Diagn. 3 (1): 26–31. doi:10.1016/S1525-1578(10)60646-0. PMC .

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